IGE- Blot
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IGE- Blot |
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| Schneiden der Membran in 2-3 mm breite
Streifen. 7 Streifen werden für den IgE-Blot verwendet und 5 werden
für den IgG-Blot gebraucht.
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Die Streifen werden mit einer Pinzette in die Inkubationswanne eingelegt. | |
| Beschriften der Markerstreifen um sie nach dem Färben noch zuordnen zu können |
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Der Marker wird mit Coomassie-Blau gefärbt damit die Proteine dauerhaft gefärbt werden. | |
| Absättigen mit Blocking-Buffer um unspezifische Bindung der Antikörper an der Membran zu verhindern. |
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Der Blocking-Buffer wird 3 mal gewechselt. | |
| Schütteln der Streifenkammern | |
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Das Blutserum wird mit Blockingbuffer 1:3 in einem Volumen von 700µl verdünnt. | |
| Auftragen des Serums mit den Antikörpern auf die Streifen. | |
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Die Streifen werden in der Inkubationswanne über Nacht geschüttelt damit sich die Antikörper spezifisch binden können. | |
| Am nächsten Tag wird wieder 3 mal gewaschen, um die Antikörper die unspezifisch gebunden haben, zu beseitigen. |
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