Auftrennung der Amylase mittels Proteingel (SDS-Gel)

Abbildung 5. Auftragung der verschiedenen Proteinproben nach 80 % Ammoniumsulfatfällung und Dialyse. S (Standard): Fermentas Prestained protein marker (#Sm0671), Auftragsmenge: 5µl;
LB: Vollmedium LB;
M9: Minimalmedium M9;
M: Methionin; E:Ethionin;
N: Norleucin.

Es wurden jeweils 20 µl Kulturüberstand auf das Gel aufgetragen (+ 5µl 5 x SDS Auftragspuffer). Die Amylasebanden sind durch den roten gestrichelten Kasten gekennzeichnet

Neben der Katalase segregiert Bacillus subtilis auch Amylase E ins Kulturmedium. Diese hat eine Masse von ca. 70 kDa und ist in Abbildung 5 mit einem roten gestrichelten Kasten gekennzeichnet. Aufgrund des geringen Anteils im Vergleich zum Gesamtproteingehalt der einzelnen Proben ist ein Vergleich der Amylasemengen untereinander kaum möglich. Hier muss eine effizientere Methode zur Aufreinigung gefunden werden. Dies könnte eventuell durch spezifische Ethanol Glykogen Fällung gelingen und wird derzeit am Max-Planck-Institut für Biochemie weiter untersucht. Das Gel zeigt aber, dass eine synthetische Amylase mit Ethionin bzw. Norleucin in den Proben vorhanden ist.